摘要
目的：多巴胺（DA）D1受体（D1R）和谷氰酸（Glu）NMDA受体（NMDAR）分别是DA受体和Glu受体家族中的一员。在体实验和脑片实验的结果表明DA能通过D1R增强NMDAR介导的电流，而体外表达系统的研究中未见报道。由于突出后致密物质95（PSD-95）对NMDAR的重要的调控作用以及该蛋白在募集信号传导蛋白方面具有重要作用，本实验旨在阐明在体外表达系统中，PSD-95在D1R对NMDAR功能调控过程中的作用。方法：为了便于观察D1R，采用增强型黄色荧光蛋白（EYFP）标记该受体。在HEK293细胞中共表达D1／NR1a／NR2B或D1／NR1a／NR2B／PSD-95，运用钙成像技术检测药物作用下NMDAR介导的钙离子内流（[Ca^2＋]1）的变化。谷氨酸／甘氨酸（Glu／Gly）通过Y—tube给药，其它药物均通过灌流给药。cAMP浓度测定，细胞组化，免疫共沉淀等技术用于检测D1R的功能及D1／PSD-95间的作用。结果：（1）受体内吞实验和cAMP浓度检测实验均证明体外表达的D1-EYFP受体具有正常的功能特性。Ca^2＋成像结果表明NMDAR激动剂Glu／Gly能细胞诱导产生稳定的Ca^2＋内流，并被NMDAR拮抗剂MK-801阻断。（2）仅表达NMDAR和有EYFP或无EYFP标记的D1R，而无PSD-95共表达时，灌流给予DA100μM不能引起Glu／Gly诱导的NR1a/NR2B受体介导的Ca^2＋内流的变化，且PKA激动剂8-Br—cAMP10μM也不能引起Ca^2＋内流的改变。（3）PSD-95共表达后，DA能浓度依赖性的增加Glu／Gly诱导的Ca^2＋内流，这种效应能被D1R拮抗剂SCH23390所阻断。（4）细胞免疫组化和免疫共沉淀的实验结果表明在HEK293表达系统中，无论有无EYFP标记，D1R与PSD-95之间均具有直接的相互作用。（5）在D1／NR1a／NR2B／PSD-95共表达系统中，PKA拮抗剂H89不仅能抑制NR1a／NR2B受体介导的Ca^2＋内流，同时还能进一步抑制DA引起的GIu／GIy介导的Ca^2＋内流。（6）PKC拮抗剂chelerythine不能抑制NR1a／NR2B受体介导的Ca^2＋内流，但能抑制DA引起的Ca^2＋内流的升高。
