胆酸通过FXR／miR-23b-3p／HNF4途径下调载脂蛋白（a）表达

目的前期研究发现miR-23b-3p高效降HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达，本研究拟在基础上分析胆酸降Apo（a）效用与miR．23b．3p的关系，并检测胆酸调控miR．23b．3p表达的机制，分析miR一23b一3p作用靶基因。研究胆酸降Apo（a）作用新机制。方法首先用miRanda、Targetscan、PITA三个生物信息学在线工具对miR-23b一3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因分析，然后验证胆酸对高表达Apo（a）细胞株HepG2的降Apo（a）效用的时间（0h、6h、12h、24h、48h）和量效（0、0．5、2、8、32mtg／L）关系，然后分析胆酸抑制Apo（a）表达与MAPK和miR-23b一3p的关系，分析胆酸活化MAPK并上调miR-23b．3p表达作用，分析胆酸调控miR-23b．3p表达与FXR及MAPK的关系，分析FXR、MAPK结合转录miR一23b-3p的基因启动子情况，最后使用荧光素酶报告系统对miR-23b一3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因验证实验。用Westernblot检测Apo（a）表达水平、p38MAPK及p-p38MAPK、实时定量PCR检测miR-23b一3p表达水平。结果miRanda、Targetscan、PITA三个生物信息学分析工具表明HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因，胆酸呈时间和剂量依赖性调控HepG2细胞Apo（a）的表达，以32mg／L和24h的作用效果最显著，48h作用效果下降，胆酸抑制Apo（a）表达与MAPK和miR-23b．3p有关，胆酸能活化MAPK并上调miR-23b．3p表达，胆酸调控miR-23b-3p表达与FXR及MAPK，FXR在转录miR-23b-3p的基因启动子区域有8个结合位点，未发现MAPK的结合位点，MAPK可能通过间接作用于转录miR-23b-3p的基因启动子区域而发挥下调miR-23b-3p作用。使用FXR拮抗剂抑制miR-23b-3p表达的效用要强于抑制MAPK，可能胆酸更多地通过FXR来介导其上调miR-23b．3p效用，而MAPK只是胆酸发挥效用的信号途径的一个分支，转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组，验证了HNF4G可作为miR-23b．3p的靶基因。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调HepG2细胞Apo（a）表达水平；胆酸降Apo（a）与FXR／miR-23b-3p／HNF4途径有关。