摘要
胃癌是威胁人类最常见的恶性肿瘤之一,目前的治疗方法主要是手术和化疗.但对中晚期胃癌的疗效却欠理想.基因治疗为恶性肿瘤的治疗开辟了新的途径.自杀基因(suicide gene)为目前研究较多的基因.TK 基因(单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 herpes simplx virus-thymidine kinase,HSV-TK)即为自杀基因之一,它能将其作用的前药9-丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)转化为磷酸化.GCV,干扰细胞 DNA 合成,导致转基因细胞的死亡.但自杀基因抗肿瘤更重要的作用是通过产生旁观者效应(bystander effect),所谓旁观者效应就是不仅转基因细胞被杀死,同时伴有周围大量未转基因的细胞亦被杀死.我们构建 TK 基因逆转录病毒表达载体,体外转染胃癌细胞株,检测其体外杀伤性.并通过转染小鼠模型胃癌,研究其体内抗肿瘤作用.1材料和方法1.1材料 TK 基因通过酶切位点 EcoRⅠ和 BamHⅠ构建于逆转录病毒载体 pLxSN.应用 PA317细胞包装逆转录病毒,培养液为 DMEM.NIH3T3为小鼠成纤维细胞,用作病毒滴度的测定.MFC 细胞为615小鼠前胃癌细胞,培养基为 DMEM,含小牛血清,置37℃培养箱培养.应用脂质体方法(按说明)将逆转录病毒质粒转染 PA317细胞,并用 G418筛选,收集含病毒上清.用 NIH3T3细胞测定病毒滴度.病毒上清经测定滴度,最高为1×10~8cfu·L^(-1).
出处
《世界华人消化杂志》
CAS
2000年第11期1293-1295,共3页
World Chinese Journal of Digestology
基金
本课题受卫生部基金(98-1-312)
上海市自然基金(98ZB14028)
上海市领先医学专业基金(94-Ⅲ-005)资助
关键词
胃肿瘤
自杀基因
TK基因
9-丙氧鸟苷
治疗
Subject headings stomach neoplasms
suicide gene
herpes simplx virus-thymidine kinase
gene therapy
transfection
gene expression
liposomes
ganciclovir
