摘要
探讨 mirna-132 对阿尔茨海默病发生和发展的影响及可能的调控机制。方法: 用 TargetScan 筛选潜在的基因,并用荧光素酶报告实验进一步确认。STRING 分析β-淀粉样前体蛋白与Cuererin 蛋白之间的相互作用网络。以 APPswe/PS1dE9双转基因小鼠和年龄匹配的野生型对照为研究模型, 实时定量 PCR 分析 APPswe/PS1ΔE9 转基因小鼠和同龄野生型小鼠脑组织中的 miR-132 和 CLU 的 mRNA 表达水平。免疫印迹进一步检测Clusterin 蛋白水平。用脂质体转染的方法建立阿尔兹海默病细胞系模型,同时分别进行miR-132 模拟和miR-132 抑制处理。进一步用 ELISA 分析 Clusterin 和 APP 的蛋白水平。结果:荧光素酶报告实验结果显示 miR-132 结合 CLU 基因的 3’-UTR 区。蛋白-蛋白相互作用网络分析结果提示 Clusterin 蛋白与β-淀粉样前体蛋白(APP ) 蛋白直接结合。实时定量 PCR分析APPswe/PS1ΔE9 转基因小鼠和同龄野生型小鼠脑组织样本,结果显示AD 组小鼠的脑组织中 miR-132 基因表达水平较对照组低,而 CLU 基因的表达水平显著增加。同时,AD 小鼠的大脑皮层组织中 CLU 蛋白水平增加。AD 细胞模型的结果显示,过表达 miR-132 或抑制 miR-132 的表达影响 CLU 和 APP 蛋白的表达水平。上述结果表明,CLU 和 APP 蛋白表达水平与 miR-132 的水平呈负相关。结论:过表达 miR-132 从而下调 CLU 的表达水平,可能改善阿尔兹海默病的症状。
