肺金生方激活Notch1信号通路诱导巨噬细胞极化抑制非小细胞肺癌的实验研究

目的:探讨肺金生方通过调控巨噬细胞极化抑制非小细胞肺癌细胞的影响与分子机制。方法:收集肺金生方、LPS作用巨噬细胞后的上清作为条件培养基(培养RAW264.7上清)用于后续实验。CCK-8法观察培养RAW264.7上清对A549细胞增殖的影响;划痕实验与Transwell侵袭实验检测培养RAW264.7上清对A549细胞迁移与侵袭能力的影响;普通光学显微镜观察肺金生方对巨噬细胞形态的影响;实时荧光定量PCR法检测肺金生方对巨噬细胞M1型标志物(CD86、iNOS)及M2型标志物(Arg-1、CD206)mRNA表达的影响;ELISA法检测肺金生方对巨噬细胞极化相关细胞因子IL-1β与IL-10分泌的影响;流式细胞术检测肺金生方对巨噬细胞极化表型的影响,实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测肺金生方对巨噬细胞Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA及蛋白表达的影响。结果:肺金生方作用于巨噬细胞RAW264.7后的培养上清可抑制A549细胞增殖、迁移及侵袭。进一步研究表明,肺金生方直接作用于巨噬细胞后,细胞形态呈M1样改变,巨噬细胞M1型标志物(CD86、iNOS)mRNA表达及M1型巨噬细胞亚群增加,同时M1型细胞因子IL-1β水平升高,而M2型标志物(Arg-1、CD206)mRNA及M2型细胞因子IL-10无明显变化。实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测发现肺金生方可促进巨噬细胞中Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA及蛋白表达。结论:肺金生方可通过调控巨噬细胞向M1型极化抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭,其诱导巨噬细胞极化的作用机制可能与上调Notch1信号通路有关。