僵蚕药材蛋白质电泳指纹图谱条件及特征分子鉴定研究

目的:优化僵蚕药材蛋白质样品的指纹图谱条件,分析并鉴定具有鉴别意义的特征分子。方法:采用SDS-PAGE电泳方法,分离不同僵蚕样品提取液中的蛋白质,筛选并考察上样量、分离胶浓度及染色方法等因素对蛋白质指纹图谱效果的影响,同时利用LC-MS/MS法分析鉴定僵蚕药材的特征蛋白质。结果:选货和统货二种规格的僵蚕药材的最佳上样量为20μg;分离胶最佳浓度为12%和14%;当分离胶浓度为8%和10%时,可分离出选货僵蚕药材的特征性63.6 kDa条带;硝酸银染色法可进一步用于微量蛋白质样品分析;僵蚕药材含有过氧化氢酶、内切-1,3-β-葡萄糖苷酶BGN13.1、非溶血性磷脂酶C、嗜热丝氨酸蛋白酶等多种活性蛋白质。结论:优化后的SDS-PAGE蛋白质指纹图谱方法可用于鉴定不同规格的僵蚕药材,该方法可准确评价僵蚕药材品质而不依赖于药材形态特征,也为其他动物类药材的真伪鉴定及品质评价提供参考和借鉴。