冬凌草甲素调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对高糖诱导的心肌细胞自噬的影响

目的探讨冬凌草甲素调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/Unc-51样激酶(ULK)1通路对高糖诱导的心肌细胞自噬的影响。方法取对数生长期的H9c2细胞,将其分为:对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(35 mmol/L葡萄糖)、冬凌草甲素低剂量组(35 mmol/L葡萄糖+5μmol/L冬凌草甲素)、冬凌草甲素中剂量组(35mmol/L葡萄糖+10μmol/L冬凌草甲素)、冬凌草甲素高剂量组(35 mmol/L葡萄糖+20μmol/L冬凌草甲素)、冬凌草甲素高剂量+AMPK抑制剂(Compound C)组(35 mmol/L葡萄糖+5μmol/L Compound C),72 h后,收集各组细胞用于后续实验。CCK-8法检测细胞存活;流式细胞术检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针法检测各组H9c2细胞内活性氧(ROS)水平;透射电镜观察H9c2细胞内自噬小体;免疫荧光检测细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链(LC)3表达;Western印迹检测H9c2细胞中Beclin1、p62、p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组H9c2细胞存活率、自噬小体数量、LC3阳性率、Beclin1、p-AMPK蛋白表达降低,细胞凋亡率、ROS水平、p62、p-mTOR、p-ULK1蛋白表达显著升高(P<0.05);与高糖组比较,冬凌草甲素低、中、高剂量组H9c2细胞存活率、自噬小体数量、LC3阳性率、Beclin1、p-AMPK蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、ROS水平、p62、p-mTOR、p-ULK1蛋白表达显著降低,且呈显著剂量依赖性(P<0.05);与冬凌草甲素高剂量组比较,冬凌草甲素高剂量+Compound C组H9c2细胞存活率、自噬小体数量、LC3阳性率、Beclin1、p-AMPK蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、ROS水平、p62、p-mTOR、p-ULK1蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路促进高糖诱导的H9c2细胞自噬。