miR-26a靶向调控FGFR4对胆囊癌细胞生物学活性的影响及相关机制

目的探讨微小RNA(miR)-26a靶向调控成纤维细胞生长因子受体(FGFR)4对胆囊癌细胞生物学活性的影响及相关机制。方法培养人胆囊癌细胞系(SGC-996细胞)、人肝内胆管上皮细胞(HIBEpic细胞),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两种细胞miR-26a及FGFR4 mRNA表达水平,Western印迹检测两种细胞FGFR4蛋白表达水平;使用Targetscan7.2软件预测FGFR4的目标mRNA,并通过双荧光素酶检测二者的结合情况。将SGC-996细胞分为空白对照组(常规培养基培养)、miR-26a过表达组(转染miR-26a mimic)、miR-26a抑制剂组(转染miR-26a inhibitor),检测细胞增殖能力、迁移能力及侵袭细胞数;Western印迹检测Wnt/β-连环蛋白(catenin)通路相关蛋白表达。结果胆囊癌细胞中miR-26a表达水平明显低于正常胆囊细胞(P<0.05);FGFR4 mRNA和蛋白表达水平明显高于正常胆囊细胞(P<0.05)。Targetscan7.2软件预测和双荧光素酶报告基因试验可知miR-26a与FGFR4启动子区存在结合位点,且miR-26a表达能够影响FGFR4活性。miR-26a过表达组胆囊癌细胞miR-26a表达水平明显高于空白对照组,miR-26a抑制剂组明显低于空白对照组(P<0.01),miR-26a过表达组FGFR4 mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组,miR-26a抑制剂组明显高于空白对照组(P<0.01);miR-26a抑制剂组胆囊癌细胞增殖率、细胞迁移率、侵袭细胞数明显低于空白对照组(P<0.01)。miR-26a过表达组胆囊癌细胞信号通路Wnt5a抗体(Wnt5a)、β-catenin、细胞周期素(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)2蛋白表达水平明显低于空白对照组(P<0.01);miR-26a抑制剂组均明显高于空白对照组(P<0.01)。结论miR-26a靶向调控FGFR4可能通过抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达在胆囊癌中发挥抑癌作用。