P2Y2通过调控肌成纤维细胞增殖促进肝脏纤维化

目的研究G蛋白家族受体P2Y2是否通过影响肌成纤维细胞功能从而在肝纤维化中发挥作用。方法通过单细胞测序分析肝纤维化中的肌成纤维细胞中的P2Y2的表达情况,进一步构建Pn-GFP、Pn-DTR、Pn-m Tm G、Pn-P2Y2、Pn-P2Y2-m Tm等转基因小鼠。通过对小鼠进行腹腔注射CCl4或胆总管结扎诱导肝纤维化模型,使用免疫荧光染色、病理切片染色、实时定量荧光PCR、肝脏羟脯氨酸和小鼠血清转氨酶等水平评估纤维化程度。结果通过单细胞测序发现,P2Y2在正常肝脏组织中的肌成纤维细胞几乎不表达,但是在纤维化肝脏组织中的肌成纤维细胞中高表达。通过对Pn-GFP小鼠腹腔注射CCl4,通过免疫荧光染色发现纤维化肝脏组织中被GFP标记的肌成纤维细胞广泛分布。通过对肝纤维化造模的Pn-DTR小鼠腹腔注射白喉毒素,对小鼠体内的肌成纤维细胞进行特异性消融,发现肝纤维化显著减轻。通过对小鼠体内的肌成纤维细胞特异性敲除P2Y2,显著减轻小鼠的肝纤维化程度。通过对Pn-m Tm G和Pn-P2Y2-m Tm G腹腔注射CCl4,敲除P2Y2之后,肝纤维化时,肌成纤维细胞数量明显减少。通过对肝纤维化造模的野生型小鼠腹腔注射P2Y2抑制剂Suramin,抑制剂组小鼠的肝脏纤维化程度明显减轻。结论通过敲除肌成纤维细胞中的P2Y2或者抑制P2Y2,可以改善肝脏纤维化,这提示P2Y2是肝脏纤维化治疗的潜在靶点。