血流环境中vWF-A1与NETs-DNA结合的拓扑结构与功能特征

目的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在炎症血栓的形成和发展中扮演着重要的角色。血管性血友病因子v WF与NETs中胞外DNA相互作用,进一步促进炎症血栓的发展。研究表明v WF通过其A1结构域与NETs中胞外DNA结合。v WF为力学响应分子,其功能受到流体剪应力的调控。血流环境中,v WF-A1与NETs中胞外DNA如何结合尚未完全清楚。方法应用原子力显微镜技术,扫描分析不同浓度v WF-A1与胞外DNA的结合特征和拓扑结构;使用流动腔技术,加载不同剪应力,测量在v WF-A1预处理,v WF-A1-DNA混合物预处理或DNA预处理中,人源血小板的黏附情况。结果随着v WF-A1浓度的增加,单条DNA上结合更多的v WF-A1,形成“珠串”型或“紧缩”型拓扑结构;DNA长度分析显示,v WF-A1的结合缩短了DNA长度。在流体剪应力环境中,DNA预处理组几乎未有血小板黏附,v WF-A1-DNA混合物预处理组黏附的血小板明显少于v WF-A1预处理组黏附的血小板,提示在流体动力学环境中,胞外DNA与血小板不发生相互作用,胞外DNA和血小板竞争性与v WF-A1结合。结论血管损伤炎症期间,血管内局部v WF-A1浓度增高利于其与胞外DNA结合,进而促进胞外DNA发挥免疫功能;同时,胞外DNA和血小板竞争性与v WF-A1结合,防止血管内血小板大量聚集形成血栓,维持止血与血栓形成之间的稳态。