长链非编码RNA DANCR调控角膜细胞DNA氧化损伤的功能研究

目的氧化应激是引发角膜疾病的重要因素。研究表明,DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)在圆锥角膜中显著增加。目前,长链非编码RNA(lnc RNA)调控角膜细胞DNA氧化损伤的功能和机制尚不清楚。方法通过生物信息学分析获得圆锥角膜差异表达lnc RNAs;根据编码性预测并构建lnc RNAs开放阅读框的表达载体,筛选能够编码小肽的lnc RNA DANCR为靶标lnc RNA;RT-PCR验证DANCR在人圆锥角膜样本的表达;利用CCK8、荧光染色、彗星电泳和微核实验,检测DANCR及其编码小肽对角膜上皮细胞(HCET)的增殖、过氧化氢(H2O2)敏感性、活性氧(ROS)水平、DNA氧化损伤修复和基因组稳定性的影响。结果DANCR在人圆锥角膜细胞中表达下调;敲低DANCR导致HCET细胞的增殖速率、H2O2敏感性、ROS水平及微核比例显著降低、DNA氧化损伤的修复水平增强;同时,在DANCR敲低细胞中回转其编码小肽能够部分逆转H2O2对细胞的杀伤作用及微核比例。结论Lnc RNA DANCR在圆锥角膜低表达,促进DNA氧化损伤的修复,降低ROS对圆锥角膜细胞的杀伤。DANCR部分依赖其编码小肽应答ROS,是调控角膜氧化应激的新因子,有助于理解角膜疾病的发病机理以及开发新的治疗策略。