过度拥挤对细胞膜脂筏微区形成的影响

目的实体瘤浸润前,肿瘤细胞异常增殖导致的过度拥挤环境使细胞经历巨大的压缩应力从而促进肿瘤浸润。而细胞膜脂筏微区作为信号转导的平台参与调控肿瘤浸润。通过研究细胞在不同拥挤状态下脂筏形成的水平,以及肿瘤浸润的能力,探讨过度拥挤对肿瘤浸润的影响及机制。方法(1)以人宫颈癌细胞He La为实验对象,构建自发拥挤环境的肿瘤模型,模拟肿瘤细胞在体内原位大量增殖后的拥挤状态。(2)利用Transwell检测不同拥挤状态的肿瘤细胞的浸润能力。(3)使用激光共聚焦显微镜、脂筏原位荧光探针、免疫荧光染色等手段检测脂筏的形成。(4)干扰脂筏水平,观测肿瘤细胞浸润能力变化。结果Transwell小室内培养的自发拥挤细胞片层中,处于过度拥挤状态的肿瘤细胞向下浸润的概率显著高于不拥挤状态的肿瘤细胞。免疫荧光染色和脂筏原位荧光探针显示过度拥挤状态的肿瘤细胞膜脂筏微区形成水平下降。加入MβCD,肿瘤细胞浸润增加;加入胆固醇,肿瘤细胞浸润降低。结论相比于正常生长状态的肿瘤细胞,过度拥挤的肿瘤细胞膜脂筏微区形成水平降低,浸润能力显著提升。抑制脂筏形成,肿瘤细胞浸润增加;促进脂筏形成,肿瘤细胞浸润降低。