摘要
探讨炎症微环境下LncRNA ANCR对hBMSCs成骨分化的影响及可能机制。方法:密度梯度分离法分离并培养hBMSCs ,将hBMSCs诱导成骨分化,采用1μg/ml葡球菌A蛋白( SPA)处理细胞构建体外模拟骨髓炎状态细胞模型。RT-qPCR 检测成骨诱导液诱导后0d和1、3、7、14d的ANCR表达水平。FISH 检测ANCR 在细胞中的定位。茜素红染色检测钙结节沉积。实时定量检测碱性磷酸酶(ALP)活性。双荧光素酶检测ANCR与miRNA-101-5P、miRNA-101-5P与IL6ST靶向关系。Western检测 IL6ST及成骨相关基因的表达。结果:在hBMSCs成骨分化过程中,ANCR表达水平呈现下降趋势。早期成骨分化基因及其蛋白和晚期成骨分化指标均显示,ANCR表达降低具有促进hBMSCs成骨分化的作用。FISH实验验证LncRNA ANCR主要定位在细胞质中。生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验证实ANCR与miRNA-101-5P、miRNA-101-5P与IL6ST均有靶向作用。在炎症微环境下,过表达miRNA-101-5p具有促进hBMSCs成骨分化的作用。结论:炎症微环境下hBMSCs成骨分化过程中LncRNA ANCR表达升高,LncRNA ANCR充当miR-101-5P的海绵调控IL6ST,影响人骨髓间充质干细胞成骨分化。
