摘要
研究HSV致病机制,寻求一种新的途径来抑制单纯疱疹病毒复发。我们发现在哺乳动物中miR-138基因是高度保守的,同时在单纯疱疹病毒I型(HSV-1)的ICP0基因3’未翻译区中有两个与miR-138种子区完全互补的靶序列,长度约有145个碱基,为了验证miR-138位点对HSV-1复制的影响,我们利用基因编辑技术CRISPR/Cas9,通过重组质粒构建,细胞转染等技术定点敲除miR-138上与ICP0互补的靶序列。利用 crispr.mit.edu 工具筛选出两个最优靶点序列 sgRNA1 和 sgRNA2,成功构建含有靶向基因序列的重组质粒,转染进细胞后基因组检测到三条电泳条带,证实细胞株中发生了预期的基因编辑。最后通过GFP荧光筛选获得miR-138突变株。 成功获得miR-138的突变细胞株,将有助于后续发掘防治HSV发生的新靶点并为获得新的疾病治疗手段提供基础依据。
