Irisin在毕赤酵母菌GS115中的重组表达及纯化

在毕赤酵母菌GS115中重组表达并通过镍柱纯化Irisin,为后续研究其对不同肿瘤细胞的作用机制奠定基础。方法 对Irisin的基因序列进行密码子优化并合成后,用带有插入位点两侧重组linker的引物扩增得到Irisin的基因片段,将其克隆到pPIC 9K质粒的EcoR Ⅰ酶切位点,构建得到Irisin的毕赤酵母表达重组质粒。将重组质粒用限制性内切酶Sal Ⅰ进行线性化,纯化后将其通过电转化的方式转入毕赤酵母GS115菌株中然后进行筛选和验证。验证正确的酵母转化子经诱导表达后,收集培养基上清用Ni-IDA琼脂糖纯化树脂进行纯化。结果 成功构建了重组质粒pPIC 9K-Irisin,酵母菌重组转化子GS115-9K-Irisin经诱导后,成功获得了Irisin的重组表达产物。结论 高产、高纯度的Irisin的重组表达产物为后续的研究奠定了坚实的基础。