摘要
在体外构建一种以人类荧光素基因为报告基因,并针对人类EFTUD二基因的化合物筛选细胞模板。方法 第一步,利用限制性内切酶双酶切LV6受体,将人类EFTUD2诱导物和荧光素酶报告基因上的结合片断重组入人类LV6慢病毒受体,从而形成LV6-Epro0.5-LUC慢病毒载体。随后,利用该载体对HepG2细胞进行重组慢病毒感染。通过对黄嘌呤霉素筛选的有限稀释方法,首先能够获得相应的荧光素酶的Epro-LUC-HepG2细胞株。之后,再经过用荧光素酶报告基因对细胞株大小的测定,就能够选出发育良好的单克隆细胞株,并进行了扩大培养。结果 已成功构建了LV6-Epro0.5-LUC类型的病毒载体细胞,并已筛选出稳定表达荧光素酶的Epro-LUC-HepG2单克隆细胞株。并已根据其对荧光素酶的报告基因研究成果,选择了具有良好表达功能的单克隆株细胞,并命名为Epro-LUC-HepG2细胞。结论 本研究成功建立了针对人类EFTUD2基因的Epro-LUC-HepG2细胞化合物筛选模型,该模型可用于筛选新型靶向免疫调节药物。该模型的建立将为深入研究EFTUD2基因的功能以及开发相关疾病的治疗策略提供重要工具。进一步的研究可以应用该模型进行高通量化合物筛选和药物研发,为治疗EFTUD2相关疾病的药物发现和开发提供有力支持。
