摘要
为保障农产品安全,建立杀螟硫磷、对硫磷和甲基对硫磷的快速、简单、准确的免疫学检测方法,制备出能够特异性识别杀螟硫磷、对硫磷和甲基对硫磷的三合一单克隆抗体。本实验在保留杀螟硫磷化学结构的基础上,将其一个甲基改造成羧基,制备得到半抗原。将半抗原分别与载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联获得完全抗原,然后进行动物免疫,经细胞融合,制备得到特异性好、灵敏度高的三合一单克隆抗体,利用间接竞争酶联免疫吸附法对抗体效价以及特异性进行测定。结果表明成功合成了免疫原和包被原,抗原包被浓度为0.5μg/mL,血清稀释倍数为1:2000。该抗体对杀螟硫磷的半数抑制(IC50)值为3.1 ng/mL,对对硫磷的IC50为4.5 ng/mL,对甲基对硫磷的IC50为3.4 ng/mL。交叉反应结果显示抗体与水胺硫磷、氧乐果、毒死蜱、马拉硫磷、苯硫磷、辛硫磷的交叉反应率均<1%。表明成功制备了特异性强、灵敏度高的单克隆抗体。本研究制备的单克隆抗体为农产品中杀螟硫磷、对硫磷和甲基对硫磷快速检测试剂盒的开发奠定了基础。
