水疱性口炎病毒L蛋白N端存在新的定位信号

水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)L蛋白是该病毒复制酶的主要成分,分子量约为241kD。通过构建L蛋白缺失突变体与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的方式,将融合蛋白置于T7启动子或CMV启动子下游,在多种动物细胞中瞬时表达了重组的融合蛋白。荧光显微镜观察结果显示,仅保留N端96个氨基酸残基或缺失N端120个以上残基时,融合蛋白均匀分布于整个细胞质中,而含有N端120个以上残基时,融合蛋白呈点状或局部分布于核周围部位。截取L蛋白96～120氨基酸片段,连接到GFP蛋白氨基端,同样融合蛋白亦特异性地分布到核周围局部区域.进一步研究含定位信号的25个残基片段发现,仅13个残基的肽段QGYSFLHEVDKEA(108～120)就具有定位功能,缺失D或V均导致定位信号完全丧失。含有这13个残基的GFP融合蛋白,在多种细胞和不同表达模式下均显示了同样的分布规律,表明L蛋白N端这种定位信号具有独立的定位功能,并且在不同细胞中是保守的。