摘要
转化生长因子β1(transforming growth factor-β1)是一类现已明确的致纤维化细胞因子,具有广泛的生物学效应,对细胞外基质(ECM)基因表达、降解、细胞增殖分化、凋亡及免疫功能都具有重要调节作用。前期我们研究发现,TGF-β1启动调控序列中单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点-509C>T与肝纤维化进展及血浆中TGF-β1浓度有明显的相关性。本研究旨在探讨抗纤维化细胞因子(IL-10、HGF、IFN-γ)对含TGF-β1基因-509C>T启动调控序列活性的影响。我们以特定-509C>T基因型患者DNA为模板,用PCR方法扩增得到一对长度为2.14kb(-1328^+812)含有-509C>T变异的TGF-β1上游基因片段,并将其与不含启动子的pCAT3-enhancer报告基因载体重组,构建重组体phT-GF2.14C和phTGF2.14T。用脂质体转染法将两种重组体分别转染至正常人肝脏细胞中,分别用IL-10(4ng/ml)、HGF(10ng/ml)、IFN-γ(20ng/ml)干预转染后细胞。ELISA法测定转染细胞的报告基因CAT活性。结果表明:肝细胞转染重组体phTGF2.14C细胞的CAT活性明显高于转染重组体phTGF2.14T(t=12.5882,P=0.0002)。IFN-γ对TGF-β1基因启动子phTGF2.14C、phTGF2.14T均具有显著抑制作用。细胞因子IL-10和HGF对其调控作用不显著。TGF-β1基因-509C>T中C等位基因可明显增强TGF-β1基因上游启动调控序列的转录活性,IFN-γ作为一种抗纤维化细胞因子在基因转录水平对含有两种等位基因-509C>T的TGF-β1基因上游启动调控序列均具有抑制作用。而作为抗纤维化细胞因子的IL-10与HGF在2.14Kb(-1328^+812)区域内对TGF-β1基因上游启动调控序列的作用不显著。
To investigate the effects of the anti-fibrotic cytokines (IL-10,HGF,IFN-γ) on the putative promoter activities of transforming growth factor-beta 1(TGF-β1) gene containing -509C>T variant,the recombinant plasmids phTGF2.14C,phTGF2.14T containing 5’flank sequences of TGF-β1 gene and -509C>T variant as well as chloramphenicol acetyltransferase (CAT),were transfected into Zhang’s hepatocytes. The activities of CAT were detected by ELISA with or without cytokine treatment. The results showed that:(1) In ...
出处
《现代免疫学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第1期46-50,共5页
Current Immunology
基金
国家自然科学基金资助项目(30270605
30770994)~~
关键词
TGF-Β1
启动序列
细胞因子
IL-10
HGF
IFN-Γ
肝纤维化
单核苷酸多态性
transforming growth factor-beta 1
cytokine
liver fibrosis
interleukin-10
hepatocyte growth factor
interferon γ
single nucleotide polymorphism
