摘要
目的 研究并建立重组腺相关病毒 2型 人凝血因子IX(recombinantadeno associatedvirustype 2 humanbloodcoagulationfactorIX ,rAAV 2 hFIX)的质量标准。方法 采用PCR法确认病毒所携带的重组核酸结构和测定辅助病毒(helpervirus)和野生型腺相关病毒 (wtAAV)的残留片段。SDS PAGE电泳测定病毒外壳蛋白分子量及纯度 ,TSKgelSP NPR阳离子交换柱系统测定病毒颗粒纯度。以斑点杂交法测定病毒颗粒数。一期法于IX因子基因剔除小鼠体内测定rAAV 2 hFIX生物学活性 ,并通过ELISA法测定感染BHK 2 1细胞后hFIX的表达量。结果 PCR法确证病毒的重组核酸结构与构建预期相同 ;在 1× 10 7VG的rAAV 2 hFIX颗粒中 ,残留辅助病毒的基因片段数少于 1个拷贝 ;在 1×10 8VG的rAAV 2 hFIX颗粒中 ,野生型AAV 2基因片段数少于 1个拷贝。病毒颗粒及外壳蛋白纯度均大于 98% ,病毒颗粒数大于 1 0× 10 1 5VG·L- 1 (virusgenome·L- 1 )。IX因子剔除小鼠肌肉注射病毒后 2 1d ,小鼠血液中人凝血因子IX活性达到大于正常人因子IX活性的 15 % ,IX因子的体外表达水平大于 2 0 0 μg·L- 1 。其他各项检测指标均符合规定。结论 建立了rAAV 2 hFIX的质量标准 。
Aim To establish quality control requirements and methods for recombinant adeno associated virus(rAAV)type 2/human blood coagulation factor IX (rAAV 2/hFIX). Methods Identification of rAAV genome fragments, potential contaminants including wild type AAV(wtAAV) and helper virus, were detected by PCR. Purity of rAAV 2/hFIX was analyzed by cation exchange HPLC and SDS PAGE. Virus partical numbers were performed by dot blot assay. hFIX expression was demonstrated by ELISA and potency of hFIX was verified...
出处
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第9期684-689,共6页
Acta Pharmaceutica Sinica
基金
国家 8 63"十五"计划主题项目(2 0 0 1AA2 15 0 71)
首都二四八重大创新工程生物医药领域资助项目(H0 10 2 10 170 113 )
关键词
基因治疗
腺相关病毒
人凝血因子
质量控制
gene therapy
adeno associated virus
human blood coagulation factor
quality control
