Rev依赖性人类免疫缺陷病毒检测结构的合成与表达

Rev-dependent HIV assay by EGFP expression

目的 利用人类免疫缺陷病毒 (HIV)低变异的调节蛋白Rev与Rev反应区 (RRE)的高亲和性 ,尝试合成一种不受变异影响的特异性病毒表达检测结构。方法 采用分子克隆技术合成含有RRE和增强的绿荧光蛋白 (EGFP)的Rev依赖性荧光表达质粒 ,采用流式细胞仪检测新质粒的表达功能。结果 新合成的质粒pDM 12 8 EGFP (pE12 8)含氨苄青霉素受体 (AmpR)选择子、SV40 启动子、EGFP基因及HIV 1 RRE片段 ,BssSI酶切后产生 3 .6、1.9和 1.5kb片断 ,HindⅢ酶切后产生 3 470、2 72 5和 879bp 3个片断 ,PCR扩增提示EGFP基因完整插入。pE12 8在Hela细胞中显示Rev依赖性表达 ,pRev不存在时 ,几乎没有EGFP表达 ;pRev存在时 ,EGFP显著表达 (P <0 .0 1)。绿荧光Hela细胞百分比随pRev比例的增加而渐次增加。结论 pE12 8能特异、敏感、快速和直观地检测HIV的表达 ,对反映HIV的感染性及病情的转归及对获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)

Objective This research study was to develop a construct for assay of viral specific expression without affection by high mutation based on the high affinity between the less mutated regulatory protein Rev and Rev response element (RRE) of HIV. Methods Molecular cloning technique was used to synthesize Rev dependant, fluorescent expression plasmid that contained RRE and EGFP. The expression of the new plasmid was further tested by flow cytometry. The new plasmid pDM128 EGFP(pE128)was composed of AmpR,...