丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达

Construction of eukaryotic expression vector containing hepatitis C virus NS5A gene and its high level expression in HL-7702 cells

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞株(HL-7702细胞)中进行表达,为今后研究HCV NS5A蛋白功能奠定基础。方法:从含HCV NS345序列的重组质粒pCDNA3.1(+)/NS345中扩增出HCV NS5A基因片段,构建pCI-neo/NS5A重组表达质粒。用脂质体将其转染HL-7702细胞,通过Western blotting印迹法鉴定NS5A蛋白。结果:用PCR方法扩增的HCV NS5A基因全长1344bp,与PGEM-T重组,测序证实所克隆的NS5A基因片段大小正确;成功地构建pCI-neo/NS5A重组表达质粒,瞬时转染HL-7702细胞表达NS5A蛋白,Western blotting印迹法显示其相对分子质量约为56000。结论:HCV NS5A的真核表达载体pCI-neo/NS5A在HL-7702细胞中能有效表达NS5A蛋白,NS5A蛋白可导致病毒复制、肝细胞癌发生,且NS5A区为IFN敏感性决定区。