志贺菌6种毒力基因的多重PCR检测

Detection of six kinds of virulence genes in Shigella species by multiplex PCR

目的:建立志贺菌6种毒力基因[志贺菌肠毒素1基因(set1)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关蛋白基因(ial)、志贺毒素1基因(stx1)及调控基因(virA)]的多重PCR鉴定方法,实现多基因的同时检测。方法:选择志贺菌的6种毒力基因作为靶基因,以A群和C群4株标准及B群和D群4株临床分离株为模型,应用降落PCR方法在1个反应管中同时进行扩增,根据扩增片段大小定性判断结果。通过样本倍比稀释检验多重PCR的灵敏性,并在NCBI网站上用BLAST检索各引物的特异性。另选取河南省2001年至2007年115株志贺菌进行多重PCR检测,以验证多重PCR的可行性。结果:多重PCR能同时检测上述6种毒力基因,与单基因PCR分别检测6种毒力基因相比具有相近的灵敏度与特异性。应用多重PCR方法检测115株志贺菌,除stx1外,其余5种毒力基因的阳性率均在85%以上。结论:多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点,适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究。

Aim:To develop a method of multiplex PCR to detect virulence genes(set1B,sen,ipaH,ial,stx1,and virA)in Shigella spp.Methods:A total of six kinds of virulence genes were selected as target genes and amplified at the same time in the reaction tube with Touchdown PCR.Reference strains of S.dysenteriae 1(CMCC51054,51342),S.boydii 2(CMCC51149,51225)and 4 clinical isolates of Shigellae(1 strain of S.flexneri 2a and var X,2 stains of S.sonnei)were used in the development of multiplex PCR.DNA template was prepared ...