摘要
构建SARS冠状病毒棘突蛋白部分序列2(S2)的原核表达质粒,分析其在大肠杆菌中的表达状况.采用逆转录聚合酶链式反应技术从SARS冠状病毒基因组中扩增出编码S蛋白的第2170到2814位碱基的基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序.用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,PCR和双酶切鉴定转化菌落.将阳性菌落经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达.RT-PCR扩增出S2特异片段,经测序与GenBank比对存在1处碱基突变.S2基因片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2构建成重组表达质粒,并在JM109中表达了S2融合蛋白.成功构建了SARS冠状病毒S2的重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达了S2融合蛋白.……
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第z1期51-52,共2页
Chinese Journal of Zoonoses
