贝氏柯克斯体表面抗原基因p1与hspB的融合基因在大肠杆菌中的表达

Expression of surface antigen gene p 1 fused with hspB of Coxiella burnetii in E.coli

目的将贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)表面抗原P1蛋白基因与热休克蛋白B(HspB)基因片段融合,并使该融合基因在大肠杆菌细胞内表达,产生P1-HspB融合蛋白.方法采用PCR方法,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增P1蛋白基因(p1)和HspB蛋白基因(hspB)片段,将两基因片段分别与原核表达载体pQE30连接,分别构建重组表达质粒pQE30/ p1和pQE30/hspB.用BamHI 和SacI DNA内切酶将p1基因片段从pQ E30/p1切下并与pQE30/hspB的hspB连接,构建重组质粒pQE30/p1-hspB. 用IPTG诱导pQE30/p1-hspB转化的大肠杆菌表达融合基因p1-hspB.结果 SDS-PAGE分析发现pQE30/p1-hspB转化的大肠杆菌表达一83 kDa融合蛋白;经薄层扫描分析,该融合蛋白约占到全菌体蛋白的12.1%;免疫印迹分析发现该融合蛋白能被贝氏柯克斯体感染小鼠血清所识别.结论构建的p1-hspB融合基因在大肠杆菌中得到了有效表达,表达的P1-HspB融合蛋白能与抗贝氏柯克斯体抗体特异反应,P1-HspB融合蛋白为Q热亚单位疫苗的研制提供了一种新型融合蛋白.