贝氏柯克斯体实时荧光定量PCR方法的建立

采用新型TaqMan-MGB探针建立贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR检测方法.根据贝氏柯克斯体特异的23S插入序列设计引物和探针,将PCR扩增的插入序列连接到T载体质粒,该重组质粒用作参比模板来建立方法.用建立的实时荧光定量PCR检测倍比稀释的参比模板,其敏感性是套式PCR检测方法的1000倍.用其它立克次体的DNA作对照模板,该定量PCR显示高度贝氏柯克斯体特异性.用建立的实时荧光定量PCR检测感染小鼠脏器样本,在小鼠的脾脏、肝脏样本中检测到贝氏柯克斯体,检测到的贝氏柯克斯体的量与感染的过程有线性关系.本研究建立的贝氏柯克斯体实时荧光定量PCR检测方法具有比普通PCR检测方法更好的特异性和更高的敏感性,其定量检测的特性特别适合对贝氏柯克斯体感染程度的评价,以及对Q热疫苗的免疫保护效果的评价.……