分枝杆菌L型的诱导及形态学观察

目的在液体培养基中加入异烟肼(INH)诱导分枝杆菌形成L型,并观察其形态、细胞结构及染色性的变化.方法在92-3 TBL液体培养基中加入不同浓度INH,分别接种H37Ra、牛型结核杆菌和堪萨斯分枝杆菌,抗酸染色观察细菌形态及染色性的变化.结果诱导H37Ra与牛型结核杆菌,INH浓度以1.25μg/ml为最佳,生成的L型呈缠绕成团的长丝体,涂片不易散开,抗酸染色阴性,偶见菌体内有抗酸阳性球状体,细胞壁染色示菌体浓染缺壁.诱导堪萨斯分枝杆菌以10μg/ml浓度INH为最佳,杆菌型与L型丝状体一直并存,细胞壁染色示丝状体浓染缺壁.扫描电镜示L型株呈缠绕成团的长丝状,丝状体可见分枝,偶见有成堆的圆球体.透射电镜示L型株长丝体和圆球体细胞壁缺失,菌体内电子密度较低.微区图谱分析显示H37Ra诱导生成的L型稳定株细胞膜厚度的平均值(44 995nm)明显大于原菌型细胞膜与细胞壁厚度之和的平均值(27 969nm),P＜0.001.结论INH临床应用中耐药菌株的出现,可能与其有关;液体培养基中诱导的分枝杆菌生成L型以丝状体为多见.