用RT-PCR方法从人胎肝细胞内克隆VEGF基因的研究

血管内皮细胞生长因子具有维持血管正常功能,促进血管内皮细胞增殖,提高血管通透性,改变细胞外基质的等作用,与创伤组织的修复和血管生成密切相关。为此,本研究利用RT-PCR技术钓取VEGF基因的cDNA序列。具体方法是,用常规方法从胎肝组织中提取纯度高RNA后进行甲醛变性凝胶电泳;电泳结束后,在紫外灯下可看见凝胶上有285和185两条清晰的电泳带,其亮度之比约为2:1,这显示:获得的RNA较完整,没有降解。取适量胎肝细胞总RNA,遵循PolyATtraet(mRNA Isolation System的操作要求分离纯化mRNA后,以01190(dT)为引物,遵循。DNASynthesis System操作步骤合成dseDNA。根据文献报道的VEGF基因序列,用Goldkey软件设计的PCR反应体系中的上下游引物,它们分别为:上游引物为:5’一CGGCTAGCGC-CTCCGAAACCA TGAACT-3’,下游引物为:5’一GGTAC-CTCACCGCCTCGGCTTGTCACATCT一3’,两条引物5夕端下画线碱基序列分别为Nhel和Kpnl的酶切位点。