一种基于酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶的蛋白亲和层析纯化体系

蛋白质是生命活动的主要承担者.蛋白质的结构和功能的研究在后基因组时代尤为重要.为深入分析蛋白质的结构和功能,研究者们需要分离纯化大量不同的蛋白质.亲和层析具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点已成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一.目前,常用的亲和层析标签有多聚组氨酸、谷胱甘肽转硫酶、麦芽糖结合蛋白等,但不同的标签各有其优缺点.例如:研究发现如果表达的蛋白表面有几个接近的组氨酸,此蛋白可能结合Ni-NTA介质,最终和目的蛋白一同洗脱下来,导致多聚组氨酸标签纯化的蛋白纯度不够;麦芽糖结合蛋白标签的缺点为层析介质价格较高且纯化的目的蛋白纯度较低;谷胱甘肽转硫酶标签的缺点为标签蛋白中半胱氨酸的氧化可导致目的蛋白凝集,且此蛋白与其配体的结合较慢,因此,我们需要降低上样流速,延长样品的上样时间等.最近,我们开发了以酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶作为原核蛋白表达和分离纯化的标签.本文主要对其蛋白纯化原理和方法进行总结.