Rab7基因沉默对LPS活化的巨噬细胞中NO/iNOS的影响

Impact of Rab7 gene silencing on the production of NO/iNOS in LPS activated macrophages

目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P<0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P<0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P<0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P<0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。

目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P&lt;0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P&lt;0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P&lt;0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P&lt;0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。