APC、SMAD4双基因沉默研究WNT通路、TGF-β通路对大肠癌细胞粘附作用的交叉调控机制

目的Wnt通路与TGF-β通路分别在大肠癌细胞粘附中发挥重要作用,但两通路间是否存在交叉调控尚不明确,本实验的目的即是阐明大肠癌中Wnt通路和TGF-β通路交叉调控作用与机制。方法人类大肠腺癌细胞株HCT116/HT29(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库,上海)分别经携带APC-shRNA及Smad4-RNA序列的质粒(Psilencer4.1neo,Ambion)转染后,应用RNA干扰技术建立APC基因沉默、Smad4基因沉默和双基因沉默细胞系。然后应用反转录-PCR和western-blot比较每个细胞系粘附因子E-cadherin、catenins和转录因子c-myc/CyclinD1/P21/Met等在细胞中分布与表达差异上的变化。结果在APC-shRNA克隆大肠癌细胞株(APC基因沉默),TGF-β可明显抑制其过快生长速度,但丧失了诱导α、β、γ-catenin和E-cadherin表达增加作用。在对照组与沉默组间,E-cadherin/catenins/c-myc/CyclinD1/P21/Met的分布与表达存在显著性差异(P<0.05)。结论Wnt信号传导通路在正常细胞中是关闭的,但在结直肠癌细胞中被激活。TGF-β是一种多向细胞调控因子,它在肿瘤发生的早期发挥抑癌作用,但在进展期则促进肿瘤细胞的转移。TGF-β促进cadherins表达依赖于APC活性,说明Wnt通路和TGF-β通路均以APC作为共同的调控因子在大肠癌细胞粘附与生长中发挥相互调控作用。