斜带石斑白细胞cDNA文库的构建

用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA ,反转录合成第一链cDNA ,进行长距离PCR ,蛋白酶K消化 ,SfiI酶切 ,通过CHROMASPIN - 40 0柱 ,回收大于 5 0 0bp的cDNA ,与λTripIEx2载体连接 ,体外包装后构建了斜带石斑细胞的cDNA文库。库容 1 .6 5× 1 0 6 ,重组频率 82 % ,扩增后滴度 7.5× 1 0 9pfuml- 1。插入片断长度 5 0 0～ 2 30 0bp ,最多的是在 75 0～ 1 0 0 0bp范围。