经肝上下腔静脉逆行循环灌注分离、培养成体猪肝细胞

目的通过猪肝细胞分离,建立肝细胞分离的技术平台,为临床应用做准备。方法在本院动物实验中心普通小型猪麻醉后行整肝切除术,应用胶原酶灌注技术行整肝灌注,观察灌注效果,灌注细胞行培养、冻存,PCR检测。结果 分离得到的肝细胞数总量为2.5×1010,细胞活力在分离后1h、6h、11h,16h、24h细胞活力分别为:86%、80%、77%、75%、74%;细胞培养,可见肝细胞贴壁生长,状态良好,PCR检测Y染色体,在1.5%琼脂糖凝胶电泳可见阳性条带。结论通过本次试验,对肝细胞分离有了初步认识,存在一些困难需解决。