CAR－bacillus亚单位rRNA基因分子克隆及斑点杂交方法的建立

用真细菌类亚单位ｒＲＮＡ中的保守序列片段合成引物，从小鼠来源的ＣＡＲ－ｂａｃｉｌｌｕｓＣＢＭ株的基因组中用ＰＣＲ方法扩增出其１．５ｋｂ大小的基因片段，两端加尾ｄＣ，和已加尾ｄＧ的ｐＢＲ３２２质粒连接，转化入ＪＭ１０９菌中，在含有四环素的培养基中挑选克隆经氨苄青霉素筛选后，在ＬＢ基液中大量增殖，经溶茵酶裂解，提取重组质粒；经ｐｓｔⅠ消化，得到１．５ｋｂ大小的插入片段，经ＨｉｎｄⅢ、ＨｉｎｆⅠ、ＥｃｏＴ１４、ＨｅａⅢ和ＸｈｏⅠ测定忠实性后，以此为模板，用非放射地高辛标记试剂盒合成探针，其灵敏性可达１．２ｐｇ，且特异性较强。