摘要
应用抑制差示杂交和5'／3’RACE PCR方法分离了小麦(Triticum aestivum L．)花粉特异性表达的全长cDNA(TaPSG719，GenBank：AY451238))，该基因全长1172bp，5’非编码区序列长达329bp，包含多个上游可译框架(uORF)；该基因编码188个氨基酸的蛋白质，大小约20kD，等电点为12．1。Northern杂交和RT—PCR分析表明该基因在成熟花粉特异表达，而在小孢子、叶片、根和未成熟的种子、幼茎和子房等组织几乎检测不到。进一步研究小麦花粉发育过程的表达水平表明，TaPSG719在单核和双核小孢子阶段不表达，在开花前5d(已完成有丝分裂)开始表达并迅速增强达到高峰，但随着花粉的成熟表达水平逐渐下降。表明TaPSG719是一个花粉中晚期特异性表达基因。经BLAST同源性分析表明，与目前已登录的基因没有显著的同源性。Southem杂交表明TaPSG719可能为一个多拷贝基因。为研究TaPSG719 cDNA 5’非编码区序列的uORF对可译框架的翻译的影响，构建不同缺失或突变的表达载体，采用麦胚体外翻译系统，结果显示含uORF的5’非编码区序列能显著抑制蛋白质的翻译水平，表明TaPSG719基因表达至少部分是在翻译水平上调控。
