mTn-3xHA/lacZ文库质粒的筛选与鉴定

目的 :从pHSS6 mTn 3xHA /lacZ质粒文库中筛选出能高水平表达lacZ基因的质粒载体。方法 :文库质粒转化大肠杆菌 ,挑单克隆 ,提质粒约 2 0 0个 ,NotI酶切 ,分别转化酿酒酵母 ,通过URA3和lacZ的表达筛选出能发生同源重组 ,并能高水平表达lacZ的质粒载体。结果 :2 0 0个质粒分别转化酿酒酵母 ,通过SC URA筛选出 11株能发生同源重组的重组子 ,再通过lacZ显色反应 ,筛选出两株有lacZ基因表达的菌株 ,其中一株能高水平表达 β gal ,另一株有较弱表达。结论 :筛选出的质粒载体为其它外源基因在酿酒酵母中稳定高效表达奠定基础。