摘要
植物果糖激酶(FRK)在果糖磷酸化中起重要作用。通过PCR技术从温州蜜柑(Citr usunshiu Marc.)基因组中扩增得到编码果糖激酶基因的2个基凶组DNA片段,分别命名为Cufrk1、Cufrk2,利用RT—PCR从果实中分离到了与Cufrk1外显子序列一致的cDNA序列,并通过RACE技术分离到这个基因的全长cDNA序列,命名为CuFRK1(GenBank号:AY561840)。Cufrk1与Cufrk2编码氨基酸序列相似性为68%。CuFRK1 cDNA全长为1459bp,5'端和3’端的非翻译区分别为167bp和239bp,该序列含有一个完整的开放读码框,编码350个氨基酸,蛋白质分子量约为37.5kD,等电点为5.03,含有2个果糖激酶糖特异结合域及3个ATP结合域,其氨基酸序列与其他植物中已分离的果糖激酶基因相似性在62%~78%:Northern分析显示,CuFRK1(Cufrk1)与Cufrk2在柑橘幼叶、发育初期果实中表达量较高,在果皮和茎中不表达,在化瓣及成熟果实中表达模式有一定差异。酶活性分析表明,果实中的果糖激酶活性随果实的发育而降低,同时,果实中的果糖不断积累,在果实整个发育过程中果糖含量与果糖激酶活性呈极显著负相关。