聚合酶联法检测产毒素霍乱弧菌

Detection of toxigenous commabacillus by polymerase chain reaction

目的研究快速、特异、灵敏的检测携带肠毒素基因的霍乱弧菌的聚合酶链法检测技术,应用于突发霍乱疫情现场和各类食品样本中霍乱弧菌的的快速检测。方法选择霍乱弧菌肠毒素基因上的CTBAB亚单位中稳定区的核苷酸序列制备成霍乱毒素的特异性引物,对O1群(稻叶、小川)、O139群霍乱弧菌标准菌株及本地流行株和60份可疑样本检测,进行PCR实验。通过稀释比较法和定时增菌培养检测法,将PCR方法与培养法、免疫胶体金膜层析法的灵敏性与特异性进行比较。结果细菌经稀释10-1～10-6以后仍PCR检测阳性,PCR的检测灵敏度为1个DNA考贝。免疫胶体金膜层析法的检测限为106/ml,并存在一定程度的假阳性。霍乱标准菌株均在546bp处出现CTBAB亚单位基因扩增产物,可疑样本均未检测CTBAB亚单位基因产物,与培养结果符合。选择其他肠道传染病病原菌进行特异性实验,证实霍乱弧菌CTBAB亚单位基因引物的特异性,应用常规培养法、一次性快速纸片法、3种方法对60份可疑样本检测证实,PCR方法的特异性与培养法一致,PCR法的特异性超过免疫胶体金膜层析法。检测灵敏度实验该引物对霍乱弧菌的检测敏感基线为1个DNA考贝。结论该实验整个过程仅需4～6小时,适用于疫情现场对霍乱弧菌的快速仪器检测。