FHIT转染人肺癌单克隆细胞的建立及对生长的抑制

目的建立外源FHIT基因转染人肺腺癌细胞A549单克隆细胞系并初步探讨FHIT基因对转染细胞生长的抑制作用。方法构建PEGFP-FHIT真核表达载体，Lipofectamine介导转染A5d9细胞，G418筛选后，有限稀释法建立单克隆细胞系FHIT-A549和PEGFP-A549。通过RT-PCR、免疫组化和荧光显微镜下观察GFP表达来鉴定转染细胞系。细胞集落形成实验研究外源FHIT基因对A549细胞体外生长的抑制作用。结果经PCR、酶切和DNA测序证实PEGFP-FHIT真核表达载体连接正确。RT-PCR表明转染细胞FHIT-A549中有FHITmRNA表达，免疫细胞化学染色FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性，而母系A548细胞和转空载体的PEGFP-A549细胞FHIT基因和蛋白表达阴性。荧光显微镜观察PEGFP-A549细胞可见满视野绿色荧光。FHIT-A549的集落形成率(2．6％)比母系A549细胞(50．1％)和转染空载体PEGFP-A549细胞(53．6％)明显降低(P<0．01)。结论外源FHIT基因在转染的人肺腺癌单克隆细胞系内稳定表达并对细胞的恶性生长有抑制作用。