PCR-SSOP并Southern杂交检测实验室筛选耐氧氟沙星结核分枝杆菌的研究

目的 探讨PCR-SSCP并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性，并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法 ①体外诱导筛选耐OFLX的自然突变株，并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)；②扩增结核分枝杆菌的gyrA基因(包括H37Rv、H37Ra、临床分离的OFLX敏感株及体外诱导筛选的耐OFLX的菌株)并对此扩增产物进行单链构象多态性(SSCP)分析及Southern杂交，以判定应用该技术的效果。结果经PCR-SSCP及Southern杂交检测，85株体外诱导的自然耐OFLX菌株，均检测到gyrA基因突变。研究发现．在OFLX 10μg／ml这一点上，明显地存在着一个耐OFLX结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可清晰地区分OFLN敏感与耐药株。本研究结果显示，以10μg／ml为界作，为判别耐OFLX的标准是适宜的。