摘要
目的:用酵母双杂交技术筛选肝细胞中与HCV E1蛋白结合蛋白的编码基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV E1基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提出质粒并测序, 进行生物信息学分析. 结果:获得了19个与E1蛋白特异陛结合的阳性克隆,其中16个克隆为已知蛋白基因和3个克隆为未知功能蛋白基因. 结论:成功克隆出与丙型肝炎病毒E1蛋白结合的肝细胞蛋白,为进一步研究HCV E1在HCV致病中的作用提供了新线索.
出处
《世界华人消化杂志》
CAS
2004年第12期2893-2895,共3页
World Chinese Journal of Digestology
基金
国家自然科学基金攻关项目
No.C03011402
No.C30070689军队"九
五"科技攻关项目
No.98D063军队回国留学人员启动基金项目
No.98H038军队"十
五"科技攻关青年基金项目
No 01Q138军队"十
五"科技攻关面上项目
No.01MB135
