利用PCR技术克隆黄瓜花叶病毒的外壳蛋白基因

CLONING OF COAT PROTEIN GENE OF CUCUMBER MOSAIC VIRUS(SD STRAIN)BY PCR

黄瓜花叶病毒(CMV)是一种植物正链RNA病毒,它由蚜虫传播,广泛分布于自然界,可以危害单子叶植物及双子叶值物的85科,365属中的775种植物,给农业生产带来很大的危害。1986年 Powell等将编码烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白的基因转入烟草细胞中表达,获得具有抗 TMV 抗性的烟草。由此启示了利用转病毒外壳蛋白基因途径来培育抗病毒植物。本实验室从山东感病烟草中分离得到一株 CMV(CMV-SD),以此病毒的 RNA 为模板合成 cDNA,利用 PCR 技术成功地克隆到其外壳蛋白基因,对此外壳蛋白基因的核苷酸序列进行了测定,结果表明它是属于 CMV WT 亚组的一株病毒。

Coat protein(CP)gene of CMV-SD was synthesized by polymerase chain reactionand then cloned in pBluescript SK.The nucleotide sequence of the cloned CP gene wasdetermined by dideoxy termination method.Comparison of the nucleotide sequence of CMV-SD CP gene in pair with that of CP genes from CMV D,Q,BD and JV strains revealedthe homologies of 93.9%,76.0%,95.9% and 93.2%,respectively.While at the amino acidsequence level,the homologies were 97.2%,79.4%,97.7% and 94.5%,respectively.Therefore,we conciuded that CMV-SD belonged to the CMV WT subgroup.