利用一步基因中断法构建克鲁氏乳酸酵母leu2突变体

将克鲁氏乳酸酵母ＬＥＵ２基因编码区的部分序列用酒酵母的ＵＲＡ３基因替换，然后用此片段转化两株克鲁氏乳酸酵母。通过体内同源重组，部分缺失的外源ｌｅｕ２片段取代下了酵母染色体上的正常的ＬＥＵ２基因，由此得到ｌｅｕ２的转化子。经对这些转化子在非选择条件下的稳定性测定，没有发现回复子。结果表明，用一步基因中断法成功地建立了稳定的ＬＥＵ２基因突变体。这为在克鲁氏乳酸酵母中构建有效的宿主－载体系统提供了一个很有用的营养缺陷型选择标记。