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用酵母双杂交系统筛选与NifA相互作用的蛋白质 被引量：1

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摘要 利用酵母双杂合系统从巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Sp中筛选与NifA有直接相互作用的蛋白质因子. 首先将nifA基因克隆到pGBD-C2载体上, 构建成诱饵质粒pGBD-nifA, 接着将巴西固氮螺菌的染色体DNA构建在pGAD-C1, pGAD-C2和pGAD-C3质粒载体上, 形成3个质粒文库YSPC1, YSPC2和YSPC3. 然后以pGBD-nifA为诱饵, 对YSPC1, YSPC2和YSPC3这3个文库进行了筛选, 得到11个阳性克隆. DNA序列分析表明, 这11个阳性克隆分为4类, 包含4个1～1.3 kb不同的基因片段. 对这4个基因片段进行同源性比较发现, 其中2个编码的蛋白质含有与信号传递有关的PAS结构域, 另外1个基因片段含有与吸收铁有关的fhuE基因, 另一个是未知蛋白. 将这4个基因片段从原来的pGAD载体转移到pGBD载体, 即互换换载体后, 它们仍然与NifA有相互作用; 对这4个基因片段进行移码突变则不再与NifA有相互作用, 说明了它们与NifA相互作用的特异性.
作者 陈三凤 管乐 涂然 孙文改 李季伦
机构地区 农业生物技术国家重点实验室 农业部农业微生物资源及其应用重点实验室
出处 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期540-545,共6页 Chinese Science Bulletin
基金 国家自然科学基金(批准号:30170020) 博士点基金(批准号:20010019002)资助项目.
关键词 相互作用 NIFA 酵母双杂交系统 蛋白质 筛选 巴西固氮螺菌 酵母双杂合系统 基因片段 染色体DNA NIFA 阳性克隆 DNA序列 同源性比较 基因克隆 质粒载体 质粒文库 NIFA 信号传递 移码突变 分析表 结构域 PAS E基因 特异性
分类号 Q936 [生物学—微生物学]
  • 相关文献

参考文献13

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二级参考文献1

共引文献1

同被引文献8

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引证文献1

二级引证文献1

科学通报
2005年 第6期

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