核酸分子杂交的方法及其在医学检验中的应用

核酸分子杂交技术能特异地检测细胞及微生物的核酸序列,广泛地使用于肿瘤学、遗传学、病理学、微生物学、细胞学、流行病学的基础研究和临床诊断。核酸分子杂交的技术主要包括标本的处理、探针的制备和标记、杂交及杂交物的检测。标本的处理用10%中性缓冲甲醛溶液固定石蜡包埋的病理切片,可用于作原位杂交;使用高浓度的硫氰酸胍直接裂解细胞并使所有的蛋白(包括核酸酶)变性形成一个适宜于杂交的液相环境,可直接进行杂交。探针的制备和标记,重点介绍了非放射性标记法,较详细介绍了生物素标记探针、地高辛标记探针、磺基化标记及叮啶酯化学发光标记等技术。杂交中使用脱(低)脂奶粉、液相杂交等简化提高检测速率。杂交物的检测,同位素标记可通过放射自显影并用计算机辅助成象分析进行定量检测;非放射性标记通过酶联产生显色反应等方法检测;化学发光检测更可能取代同位素法。