高效液相色谱荧光法快速检测人血浆及肌肉中的谷氨酰胺

RAPID DETERMINATION OF GLUTAMINE IN HUMAN PLASMA AND MUSCLE TISSUE BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY UITH FLUORESCENCE DETECTION

谷氨酰胺（ＧＬＮ）是肝脏糖异生的主要物质，同时又是肠粘膜细胞优先利用的氧化原料，在许多代谢性疾病中ＧＬＮ的需要量大大超出机体合成能力，导致血浆、肌细胞内ＧＬＮ浓度下降。ＧＬＮ浓度的下降与蛋白质合成的减少、肠粘膜萎缩及免疫功能损伤有高度的相关性，细胞内ＧＬＮ浓度的下降与病人的死亡率成正比。目前ＧＬＮ的测定多为酶法及全氨基酸谱分析法，这些方法在临床及研究中应用时既复杂费时，且成本较高。对此本文建立了一个快速简便而灵敏的反相高效液相色谱法，以邻苯二甲醛及３－巯基丙酸为衍生试剂，将ＧＬＮ柱前衍生后在Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋＣＬＣ一ＯＤＳ（１５０×６ｍｍ，５μｍ）柱上以５０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲菠（ｐＨ７．０）：乙腈（９３：７，Ｖ／ｖ）为流动相分离，流速２ｍＬ／ｍｉｎ，Ｅｘ＝２３０ｎｍ，Ｅｍ＝３８９ｎｍ，ＧＬＮ的线性范围５０～１４５０μｍｏｌ／Ｌ（γ＝０．９９８６），方法回收率为９９．６０±５．３０％，批内ＣＶ为１．７５％。以本方法测定了２１名健康成年志愿者血浆中ＧＬＮ的浓度为７１６±４６μｍｏｌ／Ｌ这一结果与文献报道基本相符合。