利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎

以转染了质粒pEGFP-N1的猪胎儿成纤维细胞与体外成熟(invitromaturation,IVM)的猪卵母细胞构建克隆胚,比较了细胞转染后G418筛选与否,卵母细胞IVM持续时间及IVM时氧分压高低对克隆胚早期发育的影响.结果如下:(ⅰ)G418连续筛选10天所得转GFP细胞的克隆胚卵裂率显著低于非筛选组(47.5%vs.71.6%,P<0.05),而囊胚率差异不显著(10%vs.10.4%,P>0.05);(ⅱ)相比于36hIVM,延长IVM时间至42h卵母细胞的核成熟明显改善(83.6%vs.96.7%,P<0.05);另外,虽然IVM42h也使得克隆胚卵裂率(59.3%vs.73.6%)及囊胚率(9.3%vs.13.2%)都略有提高,但效果不显著(P>0.05);(ⅲ)7%氧IVM42h的卵母细胞与20%氧处理组相比,克隆胚的卵裂率(70.6%vs.67.1%)以及囊胚率(11.8%vs.12.3%)差异都不明显(P>0.05).上述结果显示:(ⅰ)G418筛选对转绿色荧光蛋白基因(GFP)克隆胚卵裂不利;(ⅱ)IVM36和42h的卵母细胞对克隆胚早期发育影响不明显,但IVM42h有利于核成熟,因此构建克隆胚时仍以IVM42h的卵母细胞为宜;(ⅲ)低氧对猪转GFP克隆胚早期发育无明显促进作用.