脆性X综合征快速基因诊断方法的研究

FragileXsyndrome:arapidmethodofmoleculardiagnosis

为建立脆性Ｘ综合征的直接基因诊断快速方法，采用毛细管聚合酶链反应（ＰＣＲ）－序列胶银染法对６８例正常个体、３个脆性Ｘ综合征家系、４０例疑诊病例进行了基因检测，同时对部分样本用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法进行检测，以与前者对比。结果：正常样本可通过ＰＣＲ－序列胶银染法准确鉴定其三核苷酸重复次数［（ＣＧＧ）ｎ］；脆性Ｘ综合征家系男性先证者未能检出ＰＣＲ扩增带，２例疑诊病例亦同，１例女性先证者仅检出一条正常的（ＣＧＧ）ｎ重复序列，结合临床表型可初步确诊为患者；２例正常男性传递者及３例女性携带者均经ＰＣＲ扩增出前突变范围的扩增带而得到诊断，１例女性携带者的前突变基因（ＣＧＧ重复１５０个拷贝）未能用ＰＣＲ方法检出。整个ＰＣＲ扩增及产物的检测在４小时内即可完成。结果表明，毛细管ＰＣＲ－序列胶银染法对正常及较小前突变基因的检出较Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法更准确，具有快速、简便、价廉、安全的特点，可作为快速筛查脆性Ｘ综合征的基因诊断方法。

ToestablisharapiddetectionmethodforthedirectmoleculardiagnosisoffragileXsyndrome,weusedcapilarypolymerasechainreaction(PCR)withsilversequencegelstainningtodetectsamplesfrom68normalindividuals,3fragileXfamiliesand40suspectedpatients.Somepa-tientswerealsostudiedbyusingSouthernblothybridizationincomparisonwiththeabovemethod.Theresultsshowedthatthe(CGG)ntrinucleotiderepeatofnormalsamplescouldbeidentifiedaccu-ratelybythePCRmethod.ButthemaleprobandsoffragileXfamiliesand2suspectedpatientsfailedtoshowanyPCRproductsandonefemaleprobandcouldbeonlydetectedanormalbandof(CGG)nrepeat.Twonormaltransmitedmalesand3carriersbutonewerediagnosedbyshowingpremutationamplificationbands.ThewholeprocessesofPCRamplificationanditsidentificationofitsproductscouldbefinishedwithin4hours.ThePCRmethodwasmoresensitivethanSouthernblothybridiza-tionforscreeningnormalalelesandsmalerpremutationaleles.TheresultsdemonstratedthatPCRwithsilversequencegelstainningwasrapid,simple,inexpensiveandsafeanditcouldbeusedasamethodforscreeningfragileXsyndrome.