人Maspin cDNA克隆在真核细胞中表达及意义

The Expression of Cloning Human Maspin cDNA in Eukaryocyte and Its Significance

[目的]构建表达人Maspin的基因工程细胞。[方法]提取健康人乳腺组织的总RNA,扩增出编码Maspin的全长cDNA,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Maspin,然后转染到正常的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中,应用RT-PCR和Westernblot方法分别验证Maspin基因在CHOI/pcDNA3.1(+)/Maspin细胞中RNA水平和蛋白水平的表达,同时检测细胞培养上清中Maspin的蛋白分泌。[结果]经酶切证实,得到正向插入的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Maspin。Westernblot分析证明Maspin成功转染到CHO中并表达,且分泌到细胞外。[结论]人Maspin基因可在靶细胞表达,并能分泌到细胞外,为进一步了解Maspin的功能和转Maspin基因细胞成为治疗恶性肿瘤的效应细胞奠定了一定的基础。