中国人甲状腺乳头状癌中RET/PTC融合基因DNA序列特征的初步研究

目的应用长距离PCR(long-distance PCR,LD-PCR),从甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carci-noma,PTC)的基因组DNA中扩增RET/PTC1、3融合内含子,并分析融合点附近的DNA序列特征,探讨中国成人散发性PTC中RET/PTC融合基因的发生机理。方法20例新鲜PTC标本,用逆转录-PCR方法检测RET/PTC基因的mRNA表达,确定阳性病例及融合基因类型后利用长距离PCR扩增RET/PTC1和RET/PTC3的DNA片段。结果20例PTC新鲜组织中检测到RET/PTC1和RET/PTC3阳性病例各1例(1)RET/PTC1融合基因的DNA片段大小为3091bp,融合点位于H4基因的第1内含子和RET基因的第11内含子。融合点呈端端吻合,无缺失、插入及重复序列等改变。(2)RET/PTC3(ELE1-RET)和交互性融合(re-ciprocal fusion)后形成的相应DNA片段(RET-ELE1),大小分别为2119bp和1568bp。RET/PTC3的融合点位于ELE1基因第5内含子的Alu序列内,在ELE1基因融合点上游有polyA序列。ELE1-RET的融合点的两个碱基(gg)无法判断来源于RET或ELE1基因。结合RET/PTC3与RET-ELE1,在融合点ELE1基因有2个碱基(aa)缺失,RET基因有5个碱基(gttcc)缺失。结论Alu序列可能参与了RET/PTC3融合基因的形成。对于研究PTC中RET/PTC融合点附近的DNA序列特征及融合形成的机制,长距离PCR是一种可行性比较高的研究方法。